Fase preparatoria: In questa fase iniziale, una molecola di zucchero a 6 atomi di carbonio (solitamente glucosio) viene fosforilata due volte per formare fruttosio-1,6-bifosfato. Questo processo richiede l'ingresso di 2 molecole di ATP e utilizza gli enzimi esochinasi e fosfofruttochinasi.
Fase di scissione: Durante questa fase, il fruttosio-1,6-bifosfato viene scisso in due zuccheri a 3 atomi di carbonio:gliceraldeide-3-fosfato (GAP) e diidrossiacetone fosfato (DHAP). Queste 2 molecole sono interconvertibili ed entrambe possono procedere ulteriormente nel percorso.
Fase di profitto: Questa fase finale prevede la conversione di GAP e DHAP in piruvato, generando ATP e NADH nel processo. Questa fase consiste in diverse fasi enzimatiche, comprese le reazioni di fosforilazione e ossidazione a livello del substrato. Alla fine, vengono prodotte 2 molecole di piruvato insieme a un totale di 4 molecole di ATP e 2 molecole di NADH per ciascuna molecola di glucosio che entra nella glicolisi.